技術原理
CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是最新出現(xian)的一(yi)種(zhong)由(you)sgRNA指導Cas核(he)酸酶對靶向基(ji)因進行特定DNA修飾的技術。在這一系統中,sgRNA引導序列靶定位點剪切雙鏈DNA達到對基因組(zu)DNA 進行(xing)修飾的目(mu)的。CRISPR/Cas9系統能夠對小鼠(shu)基因(yin)(yin)組特定基因(yin)(yin)位點進行精(jing)確編輯(ji),目前瑞思元已經(jing)成功將此技術應用于小鼠基因敲除/敲入(ru)模型(xing)制備,以及(ji)條件性(xing)敲除(Loxp系統(tong))模型(xing)制備。
目(mu)前瑞思(si)元采取優化過的野生型(xing)Cas9和雙切口(kou)Cas9n(Optimized Cas9 System,OCAS and OCASn)。采用優化過(guo)的雙切口Cas9n(OCASn)可以將脫靶效應降到最低。
常規基因(yin)敲除小鼠(shu)
應用(yong)sgRNA-Cas9的方法(fa)對小(xiao)鼠所有組織和(he)細胞中(zhong)的目(mu)的基因中(zhong)全部外(wai)顯子(zi)或某些重要的外(wai)顯子(zi)或者結構功能域(yu)進行(xing)敲除,得到目(mu)的基因表達沉默的小(xiao)鼠。
運用
研究目的(de)基因(yin)(完全性敲除后非致死性)對全身(shen)生理的(de)功能(neng),
可用于自發(fa)性大(da)/小鼠疾病(bing)模型(xing)的建立(li),研究疾病(bing)致病(bing)機制和疾病(bing)治療的藥物研發(fa);
技術優勢
研發周期短(2-3個(ge)月),敲除效率高;
可實現多基因同時敲除;
打破對小鼠(shu)遺(yi)傳(chuan)(chuan)品(pin)系的限制(zhi),可以實現不同遺(yi)傳(chuan)(chuan)背(bei)景或在(zai)已(yi)有(you)基因修飾小鼠(shu)模型基礎上進行基因編輯;
制(zhi)備流程
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