技術原理
CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic
Repeats）是最新出現的一種由sgRNA指導Cas核酸酶對(dui)靶向基因進(jin)(jin)行特(te)定DNA修飾的技(ji)術。在這一系統(tong)中(zhong)，sgRNA引導序(xu)列靶定位點剪切雙鏈DNA達(da)到對基(ji)因(yin)組DNA 進(jin)(jin)行修飾的目的。CRISPR/Cas9系統(tong)能(neng)夠對小鼠基(ji)因(yin)組特(te)定基(ji)因(yin)位點進(jin)(jin)行精確編(bian)輯(ji)，目前瑞思元已經成功(gong)將此(ci)技(ji)術應用于小鼠基(ji)因(yin)敲(qiao)除/敲(qiao)入(ru)模型(xing)制備(bei)，以及條件性敲(qiao)除（Loxp系統(tong)）模型(xing)制備(bei)。
目(mu)前(qian)瑞思(si)元采取優化(hua)過的野生型Cas9和雙切(qie)口(kou)Cas9n（Optimized Cas9 System,OCAS and OCASn）。采用優化(hua)過的雙切(qie)口(kou)Cas9n(OCASn)可以將脫(tuo)靶效應降到最低(di)。
H11位點定(ding)點過表達
H11位(wei)(wei)點（也叫(jiao)Hipp11）位(wei)(wei)于小(xiao)(xiao)鼠(shu)(shu)第11號(hao)染色體，是 Eif4enif1與(yu)Drg1 這兩(liang)個(ge)基(ji)因之(zhi)間(jian)的(de)一個(ge)位(wei)(wei)點，由于H11位(wei)(wei)點位(wei)(wei)于兩(liang)個(ge)基(ji)因之(zhi)間(jian)，外(wai)源(yuan)(yuan)基(ji)因插入后對內源(yuan)(yuan)基(ji)因表(biao)達(da)的(de)影響很(hen)小(xiao)(xiao)，同時(shi)H11位(wei)(wei)點所在的(de)Eif4enif1與(yu)Drg1這兩(liang)個(ge)基(ji)因的(de)側翼序列區域具有廣泛的(de)空間(jian)和時(shi)間(jian)EST表(biao)達(da)模式，能夠使整合在此的(de)外(wai)源(yuan)(yuan)基(ji)因受指定啟動(dong)(dong)子(zi)的(de)驅(qu)動(dong)(dong)而穩定表(biao)達(da)。該(gai)位(wei)(wei)點的(de)純(chun)合敲入小(xiao)(xiao)鼠(shu)(shu)可正常發育和繁殖(zhi)。
利(li)用(yong)CRISPR/cas9系統(tong)可以在H11位點(dian)構(gou)建條(tiao)件(jian)性基因過表達(da)小鼠模型(xing)，即廣泛型(xing)強(qiang)啟動子pCAG與(yu)外源目(mu)的(de)基因cDNA之間(jian)用(yong)loxP-stop-loxP結(jie)構(gou)隔開(kai)，只有與(yu)組織特異性Cre工具鼠交(jiao)配后(hou)，才(cai)會(hui)在特異細胞或組織中(zhong)表達(da)目(mu)的(de)基因。
運用(yong)
用于人類基因功能(neng)、蛋(dan)白功能(neng)的過表達(da)研究(jiu)
技術優勢
研發周期：4-6個月(yue)；
按設計精準插入；
基本保(bao)證過表達；
遺傳穩定性高；
無(wu)需篩選，直接用于分析(xi)
制備(bei)流程
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